發布時間:2012-03-19
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川芎不同入藥形式的體外溶出與藥效學比較
劉 莉¹， 徐新剛²， 高 鵬¹， 代 龍¹
（1.山東中醫藥大 學，山東 濟南 250014；2.山東省中醫藥研究所，山東 濟南250014）
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關鍵詞：川芎；超微粉；阿魏酸；鎮痛
摘要：
目的：通過比較川芎超微粉，細粉及水提物，醇提物和雙提物的體外阿魏酸溶出量及鎮痛作用。
方法：采用槳法體外溶出實驗、薄層掃描法測定川芎各入藥形式物中阿魏酸的60min體外溶出量，用扭體法及熱板法比較其鎮痛作用。
結果：各入藥形式物（3g）中阿魏酸的溶出量分別為超微粉（0.645±0.008）mg，細粉（0.359±0.005）mg,水提物（0.220±0.004）mg ,醇提物（0.526±0.007）mg,雙提物（0.061±0.003）mg；川芎超微粉的鎮痛效果最好。
結論：川芎超微粉較細粉更能增加有效成分的溶出，提高藥效。
中圖分類號：R284.2 文獻標識碼：A 文章編號：1001-1528（2002）04-0246-03
Comparison on dissolution rates in vitro and pharmacodynamics of Rhizoma Chuanxiong
by different forms used as intermediate
LIU Li¹, XU Xin-gang ², GAO Peng¹, DAI Long¹
（1.Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan250014, China；2. Shandong Institute of Traditonal Chinese Medicine, Jinan250014, China）
Key words: Chuanxiong；supper-micronized powder ferulic acid； analgesic effect
Abstact: Objective: To compare the dissolution quantities in vitro of ferulic acid and the analgesic
effect of Rhizoma Chuanxiong by suppermicronized powder, fine powder, water extraction, alcohol extraction
and double extraction.
Methods: Their dissolution rates in vitro were determined by paddle stirring method, the dissolution
quantities of ferulic acid in 60 min were determined by TLCscaning, the analgesic effects were determined
by torsion and hot-plate methods.
Results: The dissolution quantities of ferulic acid were respectively: supper-micronized powder (0.645±0.008) mg，fine powder (0.359±0.005) mg，water extraction (0.220±0.004)mg，alcohol extraction (0.526±0.007) mg，double extraction (0.061±0.003) mg. The analgesic effect of supper-micronized powder of Rhizoma Chuanxiong was the best.
Conclusion: The suppermicronized powder of Chuanxiong improved the dissolution quantity of active
components and improved the potency.
川芎為臨床常用中藥，具有活血行氣、祛風止痛的功效，主要用于月經不調、經閉痛經、頭痛、風濕痹痛等癥〔1〕。其成方制劑以治療疼痛癥較多。目前多應用全粉入藥或水、醇等提取入藥。為探討其科學合理的用藥形式，我們通過體外溶出試驗，比較了川芎超微粉、細粉兩種粉碎工藝及水提、醇提和雙提3種提取工藝中阿魏酸的體外溶出量，并進行了鎮痛作用的藥效學比較試驗，結果超微粉和醇提物阿魏酸的溶出量多，鎮痛作用強。說明川芎的正確入藥形式為：若以全粉入藥，超微粉較細粉更能增加有效成分的溶出，提高藥效。若要減少劑量用藥，則以川芎醇提物入藥為好。
1 實驗材料
1.1 儀器
939型薄層自動鋪板器（重慶南岸貝爾德儀器技術廠）；智能溶出試驗儀（天津大學無線電廠）；CS-9301
薄層掃描儀（日本島津）；82-1型離心機（上海醫療器械廠）。
1.2 藥材
川芎藥材購自濟南建聯中藥店，經山東省中醫藥研究所生藥室鑒定為傘型科植物川芎Ligus-ticum Chuanxiong Hoort.的干燥根莖。
1.3 試劑
所用試劑均勻為分析純；阿魏酸對照品（中國藥品生物制品檢定所）。
1.4 動物
昆明種小鼠，♀♂共用，體重18~22g、24~26g，由山東中醫藥大學動物實驗中心提供。
2 方法和結果
2.1 樣品制備
2.1.1 川芎細粉 將川芎粉碎成全部通過六號篩的粉末。
2.1.2川芎微粉 將川芎超微粉碎成中心粒徑10µm以下不少于95%的微粉。
2.1.3 川芎水提物 取川芎藥材粉碎成粗粉。稱取50g，加水煎煮兩次，第1次10倍量水2h，第2次8倍量水1h，濾過，合并濾液，減壓濃縮至稠膏，真空干燥，得干膏18.1g。
2.1.4 川芎醇提物 取川芎藥材粉碎成粗粉，稱取50g，加80%乙醇提取2次，每次8倍量，每次2h，濾過，合并濾液，減壓回收乙醇并濃縮至稠膏，真空干燥，得干膏12.0g。
2.1.5 川芎雙提物 取川芎藥材粉碎成粗粉，稱取50g，加水提取揮發油至盡，收集揮發油，提取液濾過，藥渣加水煎煮1h，濾過，合并濾液，減壓濃縮成稠膏，真空干燥，得干膏20.2g。
2.2 溶出液制備
調節溶出儀水浴為37℃恒溫，精密量取1000mL人工胃液置溶出儀的燒杯中，于恒溫水浴中保溫，攪拌轉速設為100r·min-1。取粉碎樣品，分別精密稱定重量（細粉、超微粉稱取約3g，提取物稱取相當于原藥材3g的干膏量）每組3份，置測定儀的燒杯中，人工胃液接觸到樣品時開始計時，1h后，取出液體，2000r·min-1 離心20min。取上清液經濾膜過濾，即得供試溶出液。
2.3 阿魏酸含量測定
2.3.1 薄層層析及掃描條件 取硅膠G，加0.2%的CMC-Na，自動鋪板器鋪成10cm×20 cm×0.03cm的薄層板，105℃活化30min后置干燥器中保存，冷卻后備用。正已烷-氯仿-冰醋酸（8：8：1）展開，展距8cm，雙波長反射式鋸齒掃描，λs=328nm， λR =370nm，色譜圖見圖1
2.3.2 標準曲線的繪制 精密稱取阿魏酸對照品約1mg，以甲醇溶解，轉移至2mL量瓶中，加甲醇并稀釋至刻度搖勻，作為對照品溶液。精密吸取1，2，3，4，5µL點于同一硅膠G薄層板上，按上述條件展開，取出、晾干，置紫外光下365nm處檢視，定位，測定，結果表明阿魏酸在0.5~2.5µg之間上樣量與斑點峰面積積分值呈線形關系，回歸方程為Y =1124.68X+273.21，r = 0.9992。
2.3.3 樣品測定 精密吸取溶出液50mL，乙醚提取3次，每次50mL合并乙醚液，揮干，殘渣用甲醇溶解，定容于2mL量瓶中，作為供試品溶液。精密吸取供試品溶液10µL，對照品溶液1µL和5µL點于同一硅膠G薄層板上，依法測定，測定結果見表1。（川芎原藥材中阿魏酸的含量為0.0314%）。
表1 川芎中阿魏酸出量（mg/3g藥材）（n=3）
樣品組 阿魏酸溶出量x±s
川芎超微粉 0.645±0.008
川芎細粉 0.359±0.005
川芎水提物 0.220±0.004
川芎醇提物 0.526±0.007
川芎雙提物 0.061±0.012
2.4 川芎不同粉碎度的鎮痛作用
2.4.1 對0.6%醋酸扭體法的鎮痛作用比較♂小鼠60只，體重24~26g，按體重隨機分為3組，分別給于各藥物組灌胃，1次/日，連續3日，對照組給等體積的蒸餾水灌胃，末次給藥后30min，逐只腹腔注射0.6%醋酸（0.1mL/10g鼠重），觀察注射后出現第一次扭體反應的時間及15min內的扭體次數，并進行組間統計學處理，結果見表2。
2.4.2 對小鼠熱板法鎮痛作用比較 雌性小鼠60只，體重18~20g，實驗前預篩痛閾，以痛閾值大于5s，小于30s者為合格，而后隨機分為3組，分別給藥同2.4.1項，按熱板法〔2〕測定其痛閾值，進行組間t檢驗，結果見表3。
表2 川芎不同粉碎度扭體法鎮痛作用比較（x±s）
動物數 第1次扭體反應 15min內扭體
組別 （只） 潛伏期（min） （次數）
蒸餾水 20 2.51 ±0.45 30.68 ±3.48
川芎超微粉 20 3.97 ±1.52 21.56 ±5.192)
川芎細粉 20 3.08 ±0.57 24.65 ±5.491)
川芎水提物 20 2.65 ±0.77 28.72 ±4.21
川芎醇提物 20 2.96 ±0.59 25.23 ±3.761)
川芎雙提物 20 2.81 ±1.34 27.54 ±4.53
與蒸餾水組比較¹P<0.05, ²P<0.01。（下同）
表3 川芎不同粉碎度對小鼠熱板法的
鎮痛作用比較（x±s）
組別 動物數（只） 痛閥值（s）
蒸餾水 15 16.48 ±4.73
川芎超微粉 14 26.57 ±7.012)
川芎細粉 14 20.19 ±5.441)
川芎水提物 15 17.21 ±3.54
川芎醇提物 14 20.11 ±4.121)
川芎雙提物 14 18.65 ±2.47
3 小結和討論
實驗結果表明，川芎的不同粉碎及提取工藝中，超微粉及醇提物中有效成分阿魏酸的溶出量較高，鎮痛作用也較強。據文獻報道，川芎揮發油中主要成分藁本內酯有拮抗子宮收縮的作用〔3〕。有機酸類成分阿魏酸有抗炎和鎮痛作用〔4〕，但受熱易破壞，在川芎水提和雙提工藝中，因為高溫和長時間的加熱，阿魏酸大量損失。川芎超微粉因藥材細胞已破壁，更有利于有效成分的溶出，故川芎超微粉與醇提物阿魏酸的溶出量較多，鎮痛作用也較強。另外，其生物堿川芎嗪可較多的透過血腦屏障，是藥效成分之一〔5〕。但此成分極易受熱破壞，經過加熱提取及濃縮過程已損失殆盡〔6〕。因沒有購到川芎嗪的對照品，此部分工作尚需補充。
通過本次實驗可以看出，川芎醇提取中阿魏酸的溶出量僅次于超微粉，而鎮痛實驗也證實醇提法強于水提法及雙提法，僅次于超微粉及細粉。綜合考慮，我們認為在劑型允許原藥材粉入藥的情況下，如散劑、蜜丸等，川芎的入藥形式以超微粉為好，但若為液體制劑或需減少服用劑量的劑型，如滴丸等，川芎入藥形式還是以醇提物為好。
超微細粉化技術近年來應用于中藥的研究報道逐漸增多，它是利用振動對物料進行壓縮式粉碎，可將以傳統粉碎工藝得到的原生藥粉末的粒度從150~200目（75μm以下），提高到中心粒徑5~10μm以下，以達到細胞破壁的目的。這種新技術不僅可以全成分保留活性物質，而且可以使藥材中的有效成分直接暴露出來，從而使藥物吸收更加迅速、完全〔7〕。中藥有效成分的溶出與藥物在體內的生物利用度之間存在著一定的相關性〔8,9〕。綜合本研究實驗結果可以看出，川芎超細微粉化入藥或進行方劑的制劑工藝研究，是相對合理科學的。本研究亦為中藥的超細微粉化研究提供了一個新的思路。
參考文獻：
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