發布時間：2018-12-07
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炮制與超微粉碎對水蛭藥效影響的初步實驗研究
呂文海1，邱福軍2，王作明3
（1、山東中醫藥大學，山東 濟南 350014；2.中國藥材公司，北京 100062；3、山東省委醫院，山東 濟南250001）
[摘要] 目的：比較水蛭煎劑、普通散劑的藥效以及新法炮制與超微粉碎對其藥效的影響。方法：用BT-1500型離心沉降式粒度分布儀測定了生、制水蛭超微散的粒度。通過小鼠抗凝血、抗血栓作用，比較了水蛭絲水煎劑1/2煎劑劑量的普通散、超微散、制水蛭超微散的藥效。并對其安全性進行了考察。結果：供試品藥效由強到弱為制水蛭超微散、生水蛭超微散、生水蛭散、生水蛭水煎劑、對照組。結論：水蛭經超微粉碎，尤其是新法炮制后超微粉碎，可明顯改善氣味、口感，提高藥效。
[關鍵詞] 水蛭；新法炮制；超微粉碎；增效
[中圖分類號] R283.1 [文獻標識碼]B[文章編號] 1001-5302（2001）04-0241-04
水蛭作為經典的破血逐瘀藥，近代在中醫臨床與中成藥生產中得到了愈來愈廣泛的應用，并成為了一種世界性藥物。經前期工作，初步證明水蛭的主流藥用品種為螞蟥（寬體金線蛭Whit mania pigra Whit man）；切絲入藥優于《藥典》規定的切段入藥；生用在活血化瘀等藥效方面，優于傳統燙制品；按新法制成的制水蛭能在改善原藥氣味的同時，較好的保存其內在成分，且溶出效果及抗凝血、抗血栓、降低血小板聚集率、改善微循環、降膽固醇等藥效學指標，均優于傳統燙制水蛭，部分指標也優于生水蛭，有保質增效的趨勢[1]。但水蛭在臨床應用中入湯劑味劣難服，易反胃敗胃。臨床中亦有研末或裝膠囊吞服效優的經驗。
近幾年由于超微粉碎技術的發展，可達到使動、植物細胞90%以上破壁的細度。由于粒度的減小，也有利于改善藥物的氣味及服用口感。鑒于水蛭經炮制和超微粉碎后有無藥效與應用方面的優勢，未見報道，筆者對此作了初步的實驗研究。
1實驗材料
1.1供試材料
水蛭購自山東省立醫院，經李定格、李峰老師鑒定為螞蟥（寬體金線蛭Whit mania pigra Whitman）。
1.2供試品制備
水蛭絲：原藥材挑去雜質，擦凈，蓋濕紗布略潤后切2~3mm細絲。在切制過程中發現，部分藥材中間填充有白色結晶性粉末，口嘗無咸、澀味、初步印象為石膏，切絲晾干后過篩可大部脫落。經紫外燈照射45min后密閉備用。
生水蛭水煎液：凈水蛭絲2.6g，加10倍量水浸泡30min，微沸30min，過濾，藥渣加8倍量水，微沸30min，過濾，合并濾液，定容100ml，濃度為26˙ml-1。
生水蛭普通散：凈水蛭絲經粉碎研磨過100目篩。
生水蛭超微散：凈水蛭絲經SQW-6型三清微粉機粉碎。出料溫度35~40℃。
制水蛭超微散：凈水蛭絲酒潤麩制炮制后，SQW-6型三清微粉機粉碎。出料溫度同上。
3種散劑均平鋪一薄層，經紫外燈照射45min后，密切保存備用。
1.3 實驗動物與儀器
昆明種小鼠（山東中醫藥大學動物房提供）：SQW-6型三清易辰超微粉碎機；BT-1500型離心沉降式粒度分布儀。
2 實驗方法與結果
1.1水蛭超微散粒度的測定
按《藥典》規定，水蛭普通散的粒度為（150±6）µm。生、制水蛭超微散的粒度經BT-1500型離心沉降式粒度分布儀測定，結果見表1、表面化。實驗表明，生、制水蛭經微粉機粉碎，可使其中位徑分別達到10.24µm和7.79µm；最大粒徑分別為72µm和24.81µm；50%的粒度在10µm和8µm以下，90%的粒度在50µm和23µm以下，確能達到超微的效果，而且經新法炮制后更利于粉碎，其粒度明顯小于生水蛭。
表1生水蛭超微粉粒度分布測試結果
粒徑 區間頻率 累積頻率
/µm /% /%
0.00~1.00 3.33 3.30
1.00~2.00 4.70 8.80
2.00~3.00 4.93 12.93
3.00~4.00 5.38 18.32
4.00~5.00 5.27 23.59
5.00~6.00 4.71 28.30
6.00~7.00 5.40 33.70
7.00~8.00 5.79 39.49
8.00~9.00 5.50 44.99
9.00~10.00 4.23 49.22
10.00~11.00 3.86 53.08
11.00~12.00 0.72 53.80
12.00~13.00 0.00 53.80
13.00~14.00 0.78 54.58
14.00~15.00 3.15 57.73
15.00~20.00 10.59 68.31
20.00~30.00 20.19 88.50
30.00~40.00 1.13 89.63
40.00~50.00 1.02 90.65
50.00~60.00 6.19 96.84
60.00~70.00 3.05 99.89
70.00~72.00 0.11 100.00
72.00~73.00 0.00 100.00
73.00~74.00 0.00 100.00
注：中位徑10.24µm 最大粒徑72µm
2.2 供試品對小鼠凝血時間的影響取體重（28±3）g的成年雄性小鼠，隨機分為5組。水蛭煎劑組以0.4mg˙g-1劑量灌胃。3種散劑組每天灌胃臨時配成13mg˙ml-1的混懸液，以0.2mg˙g-1的劑量灌胃（煎劑的1/2量）。用生理鹽水作對照。每天3次，連續給藥3d ,第4天給藥1h后，從小鼠眼內毗球后靜脈叢取血，按毛細管法[2]，測定各組小鼠的凝血時間，經t檢驗統計分析，結果見表3。實驗表明，水蛭煎劑與水蛭散劑均有確切的抗凝活性。1/2劑量的散劑，其抗凝效果優于湯劑。超微散的抗凝活性有優于普通散的趨勢，制水蛭超微散又明顯優于生水蛭超微散。提示水蛭用新法炮制和超微粉碎后有利于增強其抗凝活性。
表2 制水蛭超策粉粒度分布測試結果
粒徑 區間頻率 累積頻率
/µm /% /%
0.00~1.00 2.59 2.59
1.00~2.00 4.19 6.77
2.00~3.00 6.51 13.28
3.00~4.00 5.22 18.50
4.00~5.00 12.06 30.56
5.00~6.00 6.20 36.75
6.00~7.00 7.03 43.79
7.00~8.00 6.26 50.05
8.00~9.00 6.85 56.89
9.00~10.00 2.84 59.73
10.00~11.00 3.51 63.24
11.00~12.00 0.64 63.88
12.00~13.00 0.00 63.88
13.00~14.00 0.72 64.60
14.00~15.00 2.77 67.37
15.00~20.00 4.09 71.46
20.00~30.00 4.75 76.21
30.00~40.00 1.99 78.20
40.00~50.00 3.38 81.58
50.00~60.00 2.16 83.74
60.00~70.00 1.92 85.66
70.00~72.00 4.61 90.27
72.00~73.00 6.17 96.43
73.00~74.00 3.57 100.00
注：中位徑7.97µm 最大粒徑24.81µm
表3 供銷試品對小鼠凝血時間的影響
組別 n 劑量 凝血時間 p
/mg˙g-1 /min
生理鹽水 10 0.4 2.96±1.43
生水蛭水煎劑 13 0.4 4.95±2.32 ＜0.05（）
生水蛭普通劑 14 0.2 6.23±2.73 ＞0.05（）
生水蛭超微散 13 0.2 6.33±2.60 ＞0.05（）
制水蛭超微散 13 0.2 9.38±2.19 ＜0.01（）
注：（）示該組與上一組比較
2.3 供試品對小鼠出血時間的影響
取體重（28±3）g的成年雄性小鼠，隨機分為5組。以上法相同劑量給小鼠灌胃3d，每天2次，第4天給藥1h，用剪尾法[2]測定各組小鼠剪尾5mm的出血時間，結果見表4。實驗表明，生水蛭水煎液與對照組相比，雖有作用增強的趨勢但無顯著性差異，而普通散劑組呈顯著性差異，兩種超微散均為極顯著性差異，制超微散更優。
表4 供試品對小鼠出血時間的影響
組別 n 劑量 凝血時間 p
/mg˙g-1 /min
生理鹽水 10 0.4 7.95±2.58
生水蛭水煎劑 10 0.4 10.28±3.19 ＞0.05（）
生水蛭普通散 12 0.2 14.32±7.08 ＜0.05（）
生水蛭超微散 12 0.2 15.42±5.09 ＜0.01（）
制水蛭超微散 10 0.2 16.45±4.55 ＜0.01（）
注：（）示與NS組比較
2.4 供試品對小鼠體內抗栓作用的影響
抗栓實驗方法學研究認為，在（37±1）℃的生理鹽水中，測定小鼠尾出血時間，與鼠頸動脈旁路血栓形成法具有很好的平行性?？勺鳛橐环N簡便易行的抗血栓形成藥物的體內初篩法用于實驗[3]。取體重（20±2）g的雄性小鼠隨機分為5組，以給定劑量灌胃3d，第4天給藥1h后，將小鼠固定，距尾尖3mm處剪斷，垂直放放（37±1）℃生理鹽水中，使尾端在液面下3cm，記錄出血時間，結果見表5。實驗表明，體內抗栓作用，也以超微散為優，但生、制品之間的差異不明顯。
表5供試品對小鼠體內抗栓作用比較
組別 n 劑量 凝血時間 p
/mg˙g-1 /min
生理鹽水 10 0.3ml 0.95±0.22
生水蛭水煎劑 10 0.390 1.09±0.25 ＞0.05（）
生水蛭普通散 12 0.195 1.24±0.59 ＞0.05（）
生水蛭超微散 10 0.195 1.66±0.76 ＜0.05（）
制水蛭超微散 10 0.195 1.69±0.53 ＜0.01（）
注：（）示與NS組比較
2.4對小鼠安全性的考察
水蛭經炮制和超微粉碎后藥效有所增強，其毒性是否增大？為此考察了供試品對小鼠的安全性。取體重（20±2）g的健康小鼠80只，隨機分為4組，1組給予1300/mg˙ml-1的水煎液，0.4ml/只，3次/d，1.56g˙d-1（相當于《藥典》規定的成人每日湯劑服用量的200倍）。其余3組分別給予130/mg˙ml-1的生水蛭普通通散、超微散和制水蛭超微散0.3ml/只，3次/d，117mg˙d-1（此為能通過灌胃器的散劑最大劑量，相當于《藥典》規定成人每日服粉末量的30倍），給藥后觀察1周，結果小鼠活動、糞便、毛色正常，無死亡。每組平均體重增加6~8g，說明水蛭經新法炮制和超微粉碎后用藥是安全的。該結果與前期工作和水蛭的亞急性毒性報道[4]相一致，支持臨床中認為“水蛭系療效卓著的無毒品”的觀點。
3 小結與討論
3.1水蛭絲入藥，既有利于其藥物成分的煎 出，又有利于祛除水蛭體內人為摻入雜質，優于《藥典》規定的切段入藥。
3.2 生水蛭經超微粉碎，90%的粒度為普通散的1/4，50%的粒度為普通散的1/15，且顏色變淺，腥味降低，質地細膩，利于吞服。1/2煎劑劑量的抗凝血、抗血栓作用優于水蛭絲煎劑，肯定更優于《中國藥典》2000年版規定的水蛭段煎劑，證明多數臨床經驗認為水蛭服散效優是正確的，利用超微技術將更有利于水蛭藥效的發揮。
1.3水蛭經新法炮制后，有利于矯正其氣味，超微粉碎后其粒度也小于生水蛭，最大粒徑為生水蛭超微粉1/3，僅為24µm。實驗藥效指標在3種散劑中呈最優趨勢，值得進一步深入研究及推廣應用。
1.4雖然藥物粒度的減小，有利于其溶解吸收并改善氣味口感，但也會引起表面能和穩定性等方面的變化。制水蛭超微粉的穩定性及最佳粒度范圍等問題，還有待于進一步研究。
1.5水蛭作為一種世界性藥物，研究最多的品種是日本醫蛭（Hirude nipponica Whitman），而我國臨床用藥的主流商品是寬體金線蛭。該品種有效部位及有效成分的研究，目前幾近空白。深入研究其成分，將有利于飲片質量的控制和炮制原理的研究，此類探索目前正在進行之中。
[參考文獻]
[1]呂文每，王琦，武繼彪，等.水蛭飲片炮制研究.中藥材，1996.19（4）：294
[2]李儀奎.中藥藥理實驗方法學.上海：上?？茖W技術出版社，1991.494.
[3]顧云，孟娟如.介紹一種簡易的抗血栓藥物體內篩選法.中國藥理學通報，1991，7（4）：317
[4]陳小野，鄒世潔.水蛭的醫學研究概述.成都中醫學院學報.1987，10 (5)：51.